分子生物学检测-服务武汉枢密脑科学技术有限公司

服务

分子生物学检测

聚合酶链式反应（PCR）原理及服务

实验原理

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物, 是体外酶促合成特异DNA片段最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。

应用

1）基因的分离、克隆和核苷酸序列分析

2）突变体和重组体的构建

3）基因多态性的分析

4）遗传病和传染病的诊断

5）由少量mRNA生成 cDNA文库

6）染色体步移。

检测服务内容

1. 基因名称及详细的样品信息；

2. 实验样本，保证样本质量；

3. 具体实验需求，如PCR产物扩增、PCR产物克隆、PCR扩增测序等。

我司提供

1）详尽的实验报告

2）中间实验数据

*样本需求

模板：cDNA(>15μl)；基因组DNA（>1μg）；质粒（>100ng）；PCR产物（>1μg）。

引物：包括上游和下游引物（> 0.2OD），客户可以自行提供，也可以交由我们设计合成。

实时荧光定量PCR原理及服务

实验原理

实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA双链特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法：染料法和TaqMan探针法。

实验流程

应用

1）mRNA、micRNA、lncRNA、cirRNA的表达检测

2）SNP的基因型分析

3）基因copy数分析

4）病毒检测

5）微生物诊断

6）测序数据验证

客户提供

1）基因名称及详细的样品信息；

2）实验样本，保证样本质量；

3）具体实验需求。

公司提供

1）详尽实验报告及结果分析

2）中间实验数据

案例

1. 相对定量

2. 绝对定量PCR

送检与交付标准

样品类型	样品需求	保存条件	运输条件
动物组织	单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解	-80℃	干冰
种子样本	去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。	-80℃	干冰
细胞样本	1. 总RNA或蛋白：10E+6 cell/指标 2. 浆/核RNA或蛋白：10E+7 cell/指标 3. 线粒体RNA或蛋白：20E+7 cell/指标注：样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃；若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量。	-80℃	干冰
全血/血清样本	用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。	-80℃	干冰
石蜡包埋样本	由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm；新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm2。	-20℃	冰袋
抗体	1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。	-20℃	冰袋
引物	干粉，≥1 OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物，附带公司引物合成单。	-20℃	冰袋或常温