AAV定向进化一站式CRO服务-服务武汉枢密脑科学技术有限公司

服务

AAV定向进化一站式CRO服务

近几十年来，病毒载体介导的基因疗法已在临床试验中用于各种疾病领域，如心血管、肌肉、代谢、神经、血液、眼科疾病以及癌症中。腺相关病毒（Associated Adeno Virus）由于不整合到宿主基因组，且具有一定的靶向组织特异性和极低的免疫原性，目前作为基因递送载体已成为一种主流且飞速发展的体内基因治疗方法之一。AAV2、AAV5、AAV8、AAV9是目前临床研究中常用的血清型，对临床中的AAV和启动子的分析研究表明，目前AAV2血清型仍是使用最多的，并且具有最多的安全性和有效性证据。自2015年以来，AAV8和AAV9在中枢神经系统（CNS）相关临床试验的增加也丰富了AAV基因治疗载体的应用，此外还有一些新衣壳如AAV-LK03、SPK-100等也受到了越来越多的关注。

尽管rAAV已经在遗传性自身免疫病、血友病、神经退行性疾病等领域取得了巨大进展，但是依旧存在着诸多问题，如给药剂量高、组织覆盖度局限、递送效率不高、中和抗体阻碍、生产过程质量控制体系不稳定等。当前的AAV疗法暂未能实现高特异性靶向心脏、肾脏、肺等组织，且降低肝靶向性、躲避免疫监视是AAV基因治疗的重点，因此获得新型AAV突变体以改善AAV性能是目前基因治疗方向中的关键技术。

目前衣壳开发的方法可分为三类：自然发现、理性设计和定向进化，随着计算机和生物信息学的发展，计算机辅助设计也成为了一项新的衣壳开发方式。自然发现和理性设计能产生一定数量的新的衣壳突变体，但由于本身对AAV结合、内化、转移、脱壳及基因表达认识有限，因此具有一定的局限性。定向进化的基础源于对自然进化的模拟，在一定选择压力下产生具有独特优势和生物学特性的遗传变异，如增强组织靶向性、免疫逃逸及增加转基因表达等。此外衣壳定向进化可以在对分子机制了解不透彻的基础上获得大量的突变蛋白。随着二代测序技术的发展，定向进化在发现新型衣壳方面更具有优势。其中通过衣壳改组（Caspid Shuffling）、易错PCR（Error-Prone PCR）、随机多肽展示（Random Peptide Display）进行定向进化可以获得大量独特的衣壳突变体。

rAAV衣壳改造常用方式（Nat Rev Genet. (2020)）

服务内容

1. 随机多肽展示文库成品

对文库构建过程进行多项优化测试；拥有多个现货AAV随机多肽展示文库，其中文库克隆正确率高、多样性高、碱基分布均匀、库容量较高。

2. 文库包装体系优化服务

可优化AAV文库衣壳与基因组一致性、包装滴度低、感染活性等问题。

3. 体外/体内衣壳突变体筛选服务、候选衣壳突变体体外/体内功能验证服务

我司拥有完备的动物模型平台，可根据客户需求提供定制化服务。

4. 不同AAV血清型文库病毒开发服务

5. cGMP级别AAV病毒生产服务

拥有293-AAV包装平台及专利核心技术One-Bac 4.0昆虫-杆状病毒AAV大规模生产系统。

服务优势

1. 完善的AAV衣壳定向进化平台，可提供从分子设计、文库构建、病毒包装、定向进化筛选及药效学评价的一站式CRO服务。

2.完善的AAV工艺优化平台，可以完成对候选衣壳突变体的一系列工艺开发。

3. 一站式基因治疗CRO/CDMO服务平台及国内独有的One-Bac 4.0昆虫-杆状病毒AAV生产系统，可实现对AAV候选衣壳突变体的大规模商业化生产。

现货产品

质粒文库名称	库容	浓度（ng/uL）	总量（mg）	A260/280	A260/230
AAV2-Lib001 （测试文库）	菌落：5×10⁶ NGS：1.2×10⁷	1230.9	6	1.88	2.3
AAV2-Lib002	菌落：4.3×10⁷	3238.7	32	1.95	2.34
AAV8-Lib001	菌落：4×10⁷	2074.9	29	1.94	2.33
AAV9-Lib002	菌落：6.8×10⁶	1207.1	24	1.93	2.31

（备注：库容以NGS测序为准，可根据需求提供NGS测序报告）

案例展示

不同衣壳突变体文库的感染活性测试

服务流程

AAV血清型筛选一站式服务