CRISPR/Cas9系统是一种由RNA引导Cas9蛋白对靶基因进行修饰的技术。将Cas9中切割域突变，就会使Cas9蛋白失去对DNA的切割活性，但不影响其与DNA的结合能力，这种失去DNA切割活性的Cas9蛋白被命名为 Dead Cas9（dCas9） 。利用gRNA介导dCas9能够精确识别靶基因的特点，将dCas9蛋白与具有转录激活功能的蛋白结构域融合，可构建具有转录激活活性的系统，简称CRISPRa。
与传统转基因相比，CRISPRa系统是通过激活细胞内源基因表达来提高目标基因的表达量，它不需要转入外源DNA，降低了由于转基因造成的基因组不可逆转突变的风险。另外结合gRNA文库，可同时激活多个基因的转录与表达。此前Gain-Of-Function筛选主要是通过cDNA文库实现，但由于部分cDNA克隆难度较大致使cDNA文库覆盖率不完全；同时cDNA文库并不能涵盖每个基因的所有转录本；基因的表达也会受到细胞内部元件的调控。利用dCas9-VP64-gRNA系统进行的高通量筛选可在同一个启动子上设计多个gRNA来提高基因的转录活性，基因转录本也会更为全面。已有研究表明，利用CRISPR/Cas9系统选择性的上调基因表达，可以用来诱导干细胞的分化或重编程、刺激组织再生、补偿遗传缺陷、激活已经失活的抑癌基因、进行基因功能筛选以及合成基因回路。
CRISPR/Cas9系统转录激活原理：dCas9与转录活化域VP64/VPR融合，表达的融合蛋白在gRNA介导下结合到启动子区，并通过VP64/VPR激活区域与PolII结合，激活基因的转录。
枢密科技可实现单个或多个基因的转录激活，也可以通过gRNA文库，实现全基因组的转录激活调控，用于基因功能的研究及靶基因的筛选。
方案一：Crispr/dSaCas9转录激活系统-AAV
| 编号 | 项目内容 | 操作方法 | 周期（周） |
| 1 | sasgRNA的设计与构建 |
AAV-U6-sasgRNA-CMV-SV40-NLS-
saCas9-NLS-Flag-WPRE
|
1 |
| 设计8条sasgRNA序列，位置ATG上游0-400bp | |||
| 2 | sasgRNA的筛选 |
在B16细胞上进行筛选，最终选出有
效序列2-4条
|
2 |
| 3 | 转录激活载体构建 |
AAV-CMV-NLS-dSaCas9-NLS-V64-
U6-sgRNA
|
3 |
| 注：sgRNA串联几个待定，需要等筛选结果 | |||
| 4 | qPCR方法转录激活验证 | 质粒转染，收细胞，内参GAPDH | 1 |
| 5 | 病毒包装 | 病毒包装，纯化，滴度检测 | 3 |
| 合计 注：周期为工作日 | 10 | ||
| 交付内容：一个病毒和两个筛选报告 | |||
价格可联系销售人员咨询，欢迎前来询价。
方案二：Crispr/dSaCas9转录激活系统-Lentivirus
| 编号 | 项目内容 | 操作方法 | 周期（周） |
| 1 | sasgRNA的设计与构建 | LV-U6-sasgRNA-CMV-SV40 NLS-saCas9-NLS-Flag-P2A-Puro-T2A-EGFP-WPRE | 1 |
| 设计8条sasgRNA序列，位置ATG上游0-400bp | |||
| 2 | sasgRNA的筛选 |
在B16细胞上进行筛选，最终选出有
效序列2-4条
|
2 |
| 3 | 转录激活载体构建 |
LV-CMV-NLS-dSaCas9-NLS-VPR-
U6-sgRNA
|
3 |
| 注：sgRNA串联几个待定，需要等筛选结果 | |||
| 4 | qPCR方法转录激活验证 | 质粒转染，收细胞，内参GAPDH | 1 |
| 5 | 病毒包装 | 病毒包装，纯化，滴度检测 | 3 |
| 合计 注：周期为工作日 | 10 | ||
| 交付内容：一个病毒和两个筛选报告 | |||
价格可联系销售人员咨询，欢迎前来询价。
注意：方案一中AAV（腺相关病毒载体）的载量为4.7kb，因此质粒中转录激活结构域选择片段大小为150bp的VP64；方案二中LV（慢病毒载体）的载量为6kb，因此质粒中转录激活结构域选择片段大小为1569bp的VPR（VP64, p65, and Rta )；但是相关文献显示VP64对蛋白过表达的效果不佳，因此可按照需求选择其中一种病毒载体进行后期实验操作。
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