细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。细胞周期反应了细胞增殖速度。PI(碘化丙锭):可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。
细胞周期各时相的DNA含量不同:
G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N);
G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N);
S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间(2N-4N)。
DAY1
制备单细胞悬液,加到六孔板,10x104 cells/孔
DAY2
加药处理12小时,每组3复孔
DAY3
收集细胞,用预冷的PBS洗一次;
预冷的70%乙醇(PBS配制)重悬,放在4 度固定过夜(可以放在-20长期保存)。
DAY4
配制染色液;
碘化丙啶染色液的配制:参考下表,根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液 | |||
1个样品 | 6个样品 | 12个样品 | |
染色缓冲液 | 0.5ml | 3ml | 6ml |
碘化丙啶染色液(20X) | 25μl | 150μl | 300μl |
RNase A (50X) | 10μl | 60μl | 120μl |
Final volume | 0.535ml | 3.21ml | 6.42ml |
注:配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存,宜当日使用。 |
固定好的细胞1000g离心5min;
预冷的PBS洗一次;
染色液重悬细胞,37℃孵育 30min;
4 度保存,当日流式检测,488nm激发波长。
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