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AAV/Lentivirus介导lncRNA过表达及干扰

AAV/Lentivirus介导lncRNA过表达及干扰

一、原理及应用介绍

     长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)一般指不具有蛋白编码能力,转录本长度超过200 nt的RNA分子,包括intronic/exonic lncRNAs、antisense lncRNAs、overlapping lncRNA和long intergenic ncRNAs(lincRNAs)。LncRNA与细胞周期和分化、发育、生殖、性别调控、衰老以及多种人类疾病密切相关,在转录沉默、转录激活、染色体修饰、核内运输等均具有重要的功能。

     lncRNA和mRNA一样是由对应的基因转录而成,具有5’帽子和poly(A)尾巴,通过剪接形成成熟体的lncRNA。lncRNA一般无蛋白编码能力,但是有很多lncRNA能编码一些短肽,保守性较低,表达具有组织特异性以及时空特性。不同的组织表达lncRNA的量是不同的,即使是同一组织中,处于不同状态时表达量也不同。不同的lncRNA在细胞内(外)的丰度也不同。

     lncRNA的功能:1、lncRNA起到miRNA海绵作用,调控靶基因表达;2、lncRNA与蛋白结合,调控蛋白功能;3、作为结构组分与蛋白质形成核酸蛋白质复合体,如lncRNA与蛋白复合物结合到基因启动子区,调控基因的转录;4、干扰邻近蛋白编码基因的表达;5、抑制RNA聚合酶Ⅱ,或介导染色质重构和组蛋白修饰,而影响基因表达;6、lncRNA与编码蛋白基因的转录本形成互补双链,干扰mRNA的剪切,进而产生不同的剪切形式;7、lncRNA与编码蛋白基因的转录本形成互补双链,在Dicer酶作用下产生内源性的siRNA,调控基因的表达水平;8、结合在特定蛋白上从而改变该蛋白的胞质定位。


图1.lncRNA在转录调控功能中的机制。LncRNAs为蓝色,编码蛋白质基因为粉红色,带有淡粉色区域指示启动子/增强子元件(Ponting CP, Oliver PL, Reik W. Cell. 2009.)

图2.LncRNA机制示意图(Wang KC, Chang HY. Mol Cell. 2011.)


LV介导lncRNA过表达应用实例

     为探索是否LncRNA MEG3可在体内影响肿瘤形成,NOZ细胞分为感染LV-NC、LV-MEG3的2组,皮下注射到裸鼠体内,结果显示过表达MEG3显著减少肿瘤体积和重量。LV-MEG3组肿瘤组织中MEG3表达水平显著高于LV-NC组,ki67阳性率更低。

图3.体内实验证明MEG3过表达抑制GBC细胞的肿瘤发生(Jin L et al.,Cell Death Dis.,2018)


二、我司提供AAV/Lentivirus介导lncRNA过表达及干扰服务

服务说明

     我司提供rAAV-LncRNA、rLV-LncRNA等lncRNA过表达载体和干扰载体构建服务,同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因,适用于普通真核表达、腺相关病毒包装、慢病毒包装与稳转细胞系建立等多种用途。


服务流程

1、客户提交lncRNA资料(ID号或者序列)、构建要求

2、lncRNA过表达载体构建

3、病毒包装

4、稳定细胞株构建(根据客户需要选择,需要客户提供目标细胞)


需客户提供内容/材料

1:过表达的目的基因模板(质粒/菌液)或基因序列(基因ID);干扰的目的基因序列(基因ID)或干扰序列/载体;

2:病毒类型选择以及要求;

3:血清型选择。


最终交付

1:载体构建报告;

2:合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量;

3:rAAV/慢病毒质检报告;

4:质检报告;

5:测序文件;

6:过表达、干扰质粒/病毒/稳定细胞系。

:过表达筛选保证3条里面有1条干扰效率达到70%以上。




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