Cn|En

技术与服务

AAV/Lentivirus介导基因过表达及RNA干扰

AAV/Lentivirus介导基因过表达及RNA干扰

一、原理及应用介绍

     基因过表达是将目的基因的编码区克隆到相应的工具病毒载体上,导入细胞使基因实现大量转录和翻译,从而实现目的基因的过表达。此外,还可选择报告基因进行目的基因表达的追踪。

     RNA干扰 (RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段(19-23 bp)外源双链 RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默或下调(knock down)。


基因过表达应用实例(Belbellaa B et al.,Mol Ther Methods Clin Dev,2020.)

     5周龄时MCK小鼠静脉注射AAV Rh.10-CAG-hFXN-HA载体治疗,并于12周龄处死取材切片行心脏组织学观察,高表达组AAV注射量是5×1013vg/kg,hFXN-HA的表达量是10,927ng/mg,低表达组AAV注射量是2.5×1013vg/kg,hFXN-HA的表达量是695ng/mg,5周龄时注射NaCl的12周龄野生型小鼠以及9周龄MCK小鼠均作为对照组。结果表明高表达组心脏切片中hFXN-HA表达最强的区域但SDH酶活受损。低表达组中没发现类似现象。


AAV介导RNA干扰应用实例

     大鼠海马脑室注射1μg海人酸(KA)造癫痫模型,并注射AAV-Hsp70 shRNA及对照,24小时后从海马组织提取蛋白做western blot检测Hsp70蛋白表达水平,以验证体内干扰效果。20天后进一步计算抽搐评分比较对癫痫发作行为的影响。结果表明AAV-Hsp70 shRNA干扰效果良好,显著下调海马中Hsp70蛋白表达,并减少癫痫发作。

图2.海马Hsp70蛋白表达及大鼠抽搐评分(Hu F,et al.,Cell Reports,2019)


二、我司提供AAV/Lentivirus介导因过表达及RNA干扰服务

基因过表达

服务流程

1:过表达载体构建(包含基因合成);

2:rAAV/慢病毒过表达病毒包装与纯化;

3:滴度检测。


需客户提供内容/材料

1:目的基因模板(质粒/菌液)或基因序列(基因ID);

2:病毒类型选择以及要求;

3:血清型选择。


最终交付

1:载体构建报告;

2:合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量;

3:质检报告;

4:测序文件;

5:过表达质粒/病毒/稳定细胞系。


RNA干扰

服务流程

1:设计三条干扰序列或客户提供干扰序列;

2:干扰载体构建以及筛选检测;

3:rAAV/慢病毒干扰病毒包装与纯化;

4:滴度检测。

注:干扰基因本底表达过低时,过表达筛选保证3条里面有1条干扰效率达到70%以上。


需客户提供内容/材料

1:干扰的目的基因序列(基因ID)或干扰序列/载体;

2:病毒类型选择以及要求;

3:血清型选择。


最终交付

1:载体构建报告;

2:合同约定的rAAV/慢病毒的滴度和病毒量;

3:质检报告;

4:测序文件;

5:干扰质粒/病毒/稳定细胞系。






信息订阅

我们将及时向您推送最新产品资讯

免责声明| 法律支持| 联系方式

地址:中国武汉东湖高新区光谷七路128号中科开物产业园1号楼
市场:027-65023363
行政/人事:027-62439686
邮箱:marketing@brainvta.com

Copyright ©2021 武汉枢密脑科学技术有限公司. All RIGHTS RESERVED.
鄂ICP备2021009124号 DIGITAL BY VTHINK