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技术与服务

外泌体研究服务

外泌体研究服务

原理及应用介绍

     外泌体是直径30-150nm的细胞外囊泡(不同文献报道的直径不全相同),含有核酸、蛋白质、脂质等多种生物大分子,几乎存在于所有体液中。


图1. 外泌体示意图(Kalluri R,LeBleu VS.Science.2020.)


外泌体的形成

细胞质膜内陷形成胞内体(endosome);

胞内体包裹生物大分子内吞;

胞内体多囊泡化;

多囊泡体与细胞质膜融合胞吐释放外泌体。

图2. 外泌体的形成(Kalluri R, LeBleu VS.Science.2020.)


外泌体的分布


图3. 外泌体的分布(Ibrahim A, Marbán E. Annu Rev Physiol. 2016.)


外泌体的功能

参与生殖和发育;

调控免疫效应;

参与代谢性或心血管疾病;

清除神经退行性疾病相关蛋白;

影响肿瘤生长、侵袭和迁移

……


外泌体的主要应用

用作疾病诊断和预后生物标志物(癌症、CNS疾病、心脏病等);

用作新型治疗剂;

用作潜在给药工具(化学药、核酸、蛋白等)。


外泌体研究方法

体内外功能研究

细胞水平

     将标记的外泌体加入受体细胞中进行共培养,观察细胞的功能变化,如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等。


图4. 细胞水平实验(图片来源:Fang T,et al.,Nat Commun.2018.)


动物水平

     将外泌体注射入动物模型中,观察动物表型变化,检测动物分子、病理等相关指标。


图5. 动物模型实验(图片来源:Fang T,et al.,Nat Commun.2018.)


外泌体示踪

染料法

     染料PKH-67(green)/PKH-26(red)可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光,主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞示踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67,PKH-26具有更长的半衰期,标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。

     DiD/DiO/DiR/DiI是亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。



图6. 外泌体示踪


荧光标记慢病毒法

     通过慢病毒载体方法,将CD63,CD81等膜蛋白带上荧光标记,带荧光的膜蛋白会表达至外泌体膜上,便于后续进行观察或其他实验。


图7. GFP-CD63融合蛋白(图片来源:Koumangoye RB,et al.,PLoS One. 2011.)


二、我司提供外泌体研究服务


图8. 技术路线


表1. 服务项目及周期



表2. 外泌体送样要求



注意事项

1.样品保存

     在提取外泌体之前,长期请保存于-80℃,短期(1-2天)可保存于4℃。尽量用新鲜样本进行提取。

2.血清源外泌体的去除

     在细胞培养上清的外泌体提取中,可将细胞培养用血清通过10万g超速离心10小时去除血清外泌体,也可选择无血清培养基进行细胞培养。

3.提取外泌体的保存

     纯化后外泌体可于4℃保存不超过一周,-80℃条件下可长期保存。

4.Western blot鉴定

     鉴定前,一般按照1:1的比例加入RIPA试剂裂解外泌体。

5.血液样本收集

     推荐使用血浆样本提取外泌体,因为血清收集后在凝血过程中,血小板受刺激会产生许多外泌体和其他形式的小泡,因此血浆是研究病理生理状态下外泌体更好的介质。对于涉及到外泌体RNA分离的研究,不能使用肝素或EDTA管去收集血液样本。


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