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跨单突触逆行标记类、生物学标记类神经干细胞

跨单突触逆行标记类、生物学标记类神经干细胞

跨单突触逆行标记类神经干细胞

     RV的囊膜糖蛋白(glycoprotein,G)是其逆行跨突触所必需的蛋白,其受体大量分布在轴突末端,感染后可沿轴突逆行进入神经元胞体开启病毒复制,G蛋白缺失的RV(RV-∆G)会丧失跨突触能力,而其复制及转录不受影响(可持续高丰度表达外源基因),可逆向高亮度标记神经元精细形态。补偿RV-G蛋白,可辅助RV-G逆行跨突触感染上一级神经元,从而实现跨单突触神经网络标记。

     利用重组的禽类肉瘤病毒(A-viansarcoma-leukosisvirus,ASLV)的外膜蛋白(EnvA)融合蛋白包装RV形成的病毒粒子,可特异性识别EnvA的受体TVA介导病毒特异性地感染细胞。利用Cre转基因鼠结合Cre-LoxP控制表达TVA及G蛋白的AAV辅助病毒,可实现只在特定区域特异类型神经元中表达TVA及G蛋白,从而利用RV-En-vA-G实现对特异类型神经元的逆向跨单级突触标记。


图1.跨单级RV改造原理及RV逆行跨单级突触标记示意图。RV-EnvA-A G-dsRed结合表达G蛋白的辅助病毒实现神经元跨单突触标记。在两侧海马、丘脑背外侧核(LD)、丘脑前背侧核(AD)、丘脑室旁核(PVA)等脑区都能看到红色荧光蛋白标记的神经元。


跨单突触逆行标记类神经干细胞产品



物学标记类神经干细胞

突触标记

     用基因工程手段将突触结构上特异性的标志物融合荧光蛋白,通过荧光观察突触结构。



荧光示踪标记



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