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技术与服务

分子生物学检测

合酶链式反应(PCR)原理及服务

实验原理

聚合酶链式反应(Polymerase Chain ReactionPCR技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物, 是体外酶促合成特异DNA片段最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

应用

1)基因的分离、克隆和核苷酸序列分析

2)突变体和重组体的构建

3)基因多态性的分析

4)遗传病和传染病的诊断

5)由少量mRNA生成 cDNA文库

6)染色体步移。

检测服务内容:

1. 基因名称及详细的样品信息;

2. 实验样本,保证样本质量;

3. 具体实验需求,如PCR产物扩增、PCR产物克隆、PCR扩增测序等。

我司提供:

1)详尽的实验报告

2)中间实验数据

*样本需求

模板:cDNA(>15μl);基因组DNA>1μg);质粒(>100ng);PCR产物(>1μg)。

引物:包括上游和下游引物(> 0.2OD),客户可以自行提供,也可以交由我们设计合成 。

实时荧光定量PCR原理及服务

实验原理

实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA双链特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法:染料法和TaqMan探针法。

实验流程:

应用

1mRNAmicRNAlncRNAcirRNA的表达检测

2SNP的基因型分析

3)基因copy数分析

4)病毒检测

5)微生物诊断

6)测序数据验证

客户提供:

1)基因名称及详细的样品信息;

2)实验样本,保证样本质量;

3)具体实验需求。

公司提供:

1)详尽实验报告及结果分析

2)中间实验数据


案例

1. 相对定量


2. 绝对定量PCR


送检与交付标准

样品类型

样品需求

保存条件

运输条件

动物组织

单个样品>0.1g2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解

-80℃

干冰

种子样本

去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g

-80℃

干冰

细胞样本

1. RNA或蛋白:10E+6 cell/指标

2. /RNA或蛋白:10E+7 cell/指标

3. 线粒体RNA或蛋白:20E+7 cell/指标

注:样本尽量新鲜,细胞收取后直接加TrizolQPCR检测)或直接冻存于-80℃;若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量。

-80℃

干冰

全血/血清样本

用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml-80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol

-80℃

干冰

石蜡包埋样本

由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm2~8 张,表面积不超过 250mm2

-20℃

冰袋

抗体

1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;

2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。

3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。

-20℃

冰袋

引物

干粉,≥1 OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。

-20℃

冰袋或常温

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