荧光定量PCR-技术与服务武汉枢密脑科学技术有限公司

技术与服务

荧光定量PCR

实时荧光定量PCR

简介

实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA双链特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法：染料法和TaqMan探针法。

具体实验流程如下：

应用

1）mRNA、micRNA、lncRNA、cirRNA的表达检测

2）SNP的基因型分析

3）基因copy数分析

4）病毒检测

5）微生物诊断

6）测序数据验证

服务内容：

客户提供：

1）基因名称及详细的样品信息；

2）实验样本，保证样本质量；

3）具体实验需求。

公司提供：

1）详尽实验报告及结果分析

2）中间实验数据

送检与交付标准

样品类型	样品需求	保存条件	运输条件
动物组织	单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解	-80℃	干冰
种子样本	去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。	-80℃	干冰
细胞样本	1. 总RNA或蛋白：10E+6 cell/指标 2. 浆/核RNA或蛋白：10E+7 cell/指标 3. 线粒体RNA或蛋白：20E+7 cell/指标注：样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃；若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量。	-80℃	干冰
全血/血清样本	用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。	-80℃	干冰
石蜡包埋样本	由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm；新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm²。	-20℃	冰袋
抗体	1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。	-20℃	冰袋
引物	干粉，≥1 OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物，附带公司引物合成单。	-20℃	冰袋或常温

案例展示

1. 相对定量

2. 绝对定量