实时荧光定量PCR
简介
实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA双链特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法:染料法和TaqMan探针法。
具体实验流程如下:
应用
1)mRNA、micRNA、lncRNA、cirRNA的表达检测
2)SNP的基因型分析
3)基因copy数分析
4)病毒检测
5)微生物诊断
6)测序数据验证
服务内容:
客户提供:
1)基因名称及详细的样品信息;
2)实验样本,保证样本质量;
3)具体实验需求。
公司提供:
1)详尽实验报告及结果分析
2)中间实验数据
送检与交付标准
样品类型
样品需求
保存条件
运输条件
动物组织
单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解
-80℃
干冰
种子样本
去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。
-80℃
干冰
细胞样本
1. 总RNA或蛋白:10E+6 cell/指标
2. 浆/核RNA或蛋白:10E+7 cell/指标
3. 线粒体RNA或蛋白:20E+7 cell/指标
注:样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃;若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量。
-80℃
干冰
全血/血清样本
用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。
-80℃
干冰
石蜡包埋样本
由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。
-20℃
冰袋
抗体
1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;
2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。
3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。
-20℃
冰袋
引物
干粉,≥1 OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。
-20℃
冰袋或常温
1. 相对定量
2. 绝对定量
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