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技术与服务

circRNA过表达及干扰

cirRNA过表达及干扰载体设计与构建

简介

      环状RNA(circRNA)是一类特殊的非编码RNA分子,也是RNA领域最新的研究热点。与传统的线性RNA(linear RNA,含5’和3’末端)不同,circRNA是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴,并以共价键形成封闭环状结构,由非经典剪接方式进行反向剪接而形成。不受RNA外切酶影响,表达更稳定,不易降解。近几年的研究表明,circRNA在生物的生长发育、对外界环境的抵御、疼痛等方面具有重要的调控作用。circRNA功能众多,可作为miRNA的海绵,竞争性结合miRNA,发挥ceRNA的调控功能,调控基因表达。近年来还发现与疾病的发生和发展密切相关,在疾病诊断标记物等方向具有很大的应用前景。


一、circRNA干扰服务

       RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段(19-23 bp)外源双链RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默或下调(knock down)。枢密科技针对circRNA的接头序列设计多条siRNA序列,筛选特异性高效干扰目的circRNA表达的siRNA,构建shRNA病毒载体并包装所需病毒。也可直接转染或通过包装慢病毒感染细胞筛选circRNA特异性敲低稳定细胞株。


服务流程

1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求

2、设计多条siRNA,筛选高效率干扰siRNA

3、设计circRNA特异性引物,检测敲低circRNA的效率

4、构建shRNA载体,干扰慢病毒或腺相关病毒包装

5、稳定细胞株构建(可选,需要客户提供目标细胞)


二、circRNA过表达服务

      目前枢密科技提供pAAV-ciR、pLV-ciR等circRNA过表达载体构建服务,同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因,适用于普通真核表达、慢病毒包装与稳转细胞系建立、腺相关病毒包装等多种用途。该系列载体均含有circRNA环化表达框架,用于克隆目标circRNA的线性序列,之后转染细胞后可通过RNA剪切形成circRNA分子。


服务流程

1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求

2、circRNA过表达载体构建

3、载体验证(根据客户选择,默认提供293细胞转染验证环化效果)

4、病毒包装

5、稳定细胞株构建(根据客户需要选择,需要客户提供目标细胞)


circRNA慢病毒载体


circRNA腺相关病毒载体






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