RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段(19-23 bp)外源双链RNA(siRNA)导入细胞中,引发细胞中相应mRNA高效特异性降解,从而导致特定基因表达沉默或下调(knock down)。枢密科技针对circRNA的接头序列设计多条siRNA序列,筛选特异性高效干扰目的circRNA表达的siRNA,构建shRNA病毒载体并包装所需病毒。也可直接转染或通过包装慢病毒感染细胞筛选circRNA特异性敲低稳定细胞株。
服务流程
1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求
2、设计多条siRNA,筛选高效率干扰siRNA
3、设计circRNA特异性引物,检测敲低circRNA的效率
4、构建shRNA载体,干扰慢病毒或腺相关病毒包装
5、稳定细胞株构建(可选,需要客户提供目标细胞)
目前枢密科技提供pAAV-ciR、pLV-ciR等circRNA过表达载体构建服务,同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因,适用于普通真核表达、慢病毒包装与稳转细胞系建立、腺相关病毒包装等多种用途。该系列载体均含有circRNA环化表达框架,用于克隆目标circRNA的线性序列,之后转染细胞后可通过RNA剪切形成circRNA分子。
服务流程
1、客户提交circRNA资料(ID号或者序列)、构建要求
2、circRNA过表达载体构建
3、载体验证(根据客户选择,默认提供293细胞转染验证环化效果)
4、病毒包装
5、稳定细胞株构建(根据客户需要选择,需要客户提供目标细胞)
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