cirRNA过表达及干扰载体设计与构建
简介
环状RNA（circRNA）是一类特殊的非编码RNA分子，也是RNA领域最新的研究热点。与传统的线性RNA（linear RNA，含5’和3’末端）不同，circRNA是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴，并以共价键形成封闭环状结构，由非经典剪接方式进行反向剪接而形成。不受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。近几年的研究表明，circRNA在生物的生长发育、对外界环境的抵御、疼痛等方面具有重要的调控作用。circRNA功能众多，可作为miRNA的海绵，竞争性结合miRNA，发挥ceRNA的调控功能，调控基因表达。近年来还发现与疾病的发生和发展密切相关，在疾病诊断标记物等方向具有很大的应用前景。
一、circRNA干扰服务
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术通过将与内源mRNA同源的小片段（19-23 bp）外源双链RNA（siRNA）导入细胞中，引发细胞中相应mRNA高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默或下调（knock down）。枢密科技针对circRNA的接头序列设计多条siRNA序列，筛选特异性高效干扰目的circRNA表达的siRNA，构建shRNA病毒载体并包装所需病毒。也可直接转染或通过包装慢病毒感染细胞筛选circRNA特异性敲低稳定细胞株。
服务流程
1、客户提交circRNA资料（ID号或者序列）、构建要求
2、设计多条siRNA，筛选高效率干扰siRNA
3、设计circRNA特异性引物，检测敲低circRNA的效率
4、构建shRNA载体，干扰慢病毒或腺相关病毒包装
5、稳定细胞株构建（可选，需要客户提供目标细胞）
二、circRNA过表达服务
目前枢密科技提供pAAV-ciR、pLV-ciR等circRNA过表达载体构建服务，同时可选择携带各种荧光报告基因或抗性基因，适用于普通真核表达、慢病毒包装与稳转细胞系建立、腺相关病毒包装等多种用途。该系列载体均含有circRNA环化表达框架，用于克隆目标circRNA的线性序列，之后转染细胞后可通过RNA剪切形成circRNA分子。
服务流程
1、客户提交circRNA资料（ID号或者序列）、构建要求
2、circRNA过表达载体构建
3、载体验证（根据客户选择，默认提供293细胞转染验证环化效果）
4、病毒包装
5、稳定细胞株构建（根据客户需要选择，需要客户提供目标细胞）
circRNA慢病毒载体
circRNA腺相关病毒载体
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