一、简介

伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科，病毒粒子呈球形，直径约150-200 nm，由二十面体衣壳、皮层和囊膜组成。其基因组为长度约150 kb的线性双链DNA，囊膜表面分布有gB、gC、gD等糖蛋白，介导病毒与宿主细胞的黏附与融合。通过同源重组等分子遗传学技术，PRV可定向插入超过10 kb的外源基因（如荧光蛋白、报告基因），为神经环路示踪提供灵活的基因编辑工具。

病毒株特性与神经示踪优势

自然宿主与安全性：PRV自然宿主为猪，啮齿动物可感染，灵长类动物对其敏感性极低。尽管PRV对实验人员致病性低，但仍需在生物安全二级（BSL-2）实验室中操作，采取黏膜防护（如护目镜、手套）等措施。

经典毒株对比：

Becker株：毒力强，可顺行及逆行跨突触传播，因安全性风险和示踪方向性差，极少用于神经科学研究。

Bartha株（疫苗株）：经基因缺失致弱，仅能逆向跨突触传播（从突触后神经元至突触前神经元），可沿神经轴突从外周快速向中枢神经系统扩散，是解析神经网络的常用工具株。

PRV示踪的核心优势

跨突触传递能力：可逆向跨越多个突触层级，示踪全脑范围的输入神经网络；

基因工程灵活性：支持大片段外源基因插入，兼容荧光标记、基因表达调控等操作；

神经元特异性感染：高亲和力结合神经元受体，极少感染胶质细胞等非神经细胞。

图1.跨突触病毒标记细胞的方式

（Xu X, Holmes TC, Luo MH, et al. Neuron. 2020）

图2.PRV感染在神经环路中的跨突触传播

（Ekstrand MI, Enquist LW, Pomeranz LE. Trends Mol Med. 2008）

二、逆向跨突触示踪原理

逆向跨多级系统

病毒感染神经细胞后，其基因组释放并进入细胞核，一方面完成病毒DNA复制、转录及翻译等生命循环事件，另一方面可介导外源基因的表达。新产生的子代病毒粒子通过逆向轴突运输，从被感染神经元的突触后膜释放，继而侵入与之形成突触连接的突触前神经元，此过程称为逆向跨突触传播。病毒可在突触前神经元内再次复制，并重复上述逆向跨突触过程，实现跨多级神经网络的传播。

三、荧光标记株的技术优化

采用免疫荧光检测野生型PRV感染时（PRV抗原），信号通常较弱，需依赖免疫组化等信号放大技术进行检测。为解决这一问题，我司基于Bartha株开发了PRV531（EGFP标记）和PRV724（mRFP标记）两种重组病毒，将荧光蛋白基因插入病毒基因组的非必需区域，实现高强度组成型荧光表达，无需免疫组化即可直接观察。

在此基础上，我司经过进一步的优化升级，成功开发出增强版PRV：PRV-CAG-HBEGFP和PRV-CAG-HBmRuby3。该系列毒株不仅进一步提升了荧光亮度，还优化了信号稳定性，最终成为高效的逆向跨多突触示踪工具，可精准标记神经元的多级上游输入连接，满足神经环路结构解析的科研需求。

四、我司增强版PRV感染效果

实验动物：小鼠

注射滴度：2.00E+9 PFU/mL

注射位置：上肢肌肉（指浅屈肌）

注射量：4 μL/只

注射后5天取材，成像。

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