一、简介

慢病毒载体（Lentiviral vectors，LVs）是在人免疫缺陷病毒（HIV-1病毒）基础上改造而成的病毒载体系统，其核心优势在于能稳定整合目标基因至宿主细胞基因组，实现长期稳定表达，且兼容性极广，可感染分裂与非分裂细胞。这使得LV在神经科学、细胞生物学研究以及药物开发等关键领域成为不可或缺的工具。然而，慢病毒的高效包装一直是困扰科研人员的一大难题，往往面临时间成本高昂、操作复杂且病毒滴度难以保证等诸多挑战。

为助力科研工作者攻克这些难题，枢密科技依托于专业的病毒包装服务平台，自主研发并推出了慢病毒包装试剂盒（Lentiviral Packaging Kit），旨在帮助科研工作者更高效、便捷、稳定地完成慢病毒包装，同时显著节省成本，提高科研效率。

慢病毒基因组结构（A）HIV-1基因组的简化示意图；（B）慢病毒颗粒结构；（C）第三代慢病毒包装系统中使用的质粒。（Rittiner, Joseph Edward et al., Frontiers in molecular neuroscience, 2020.）

二、产品介绍

慢病毒包装试剂盒包含优化的慢病毒包装辅助质粒混合物（Lenti-helper Mix）、表达EGFP荧光蛋白的对照质粒（Lenti-EGFP-control）、高效转染试剂（293 Transfection Reagent）及慢病毒滴度增强剂（Titer Enhancer Reagent)，可兼容第二代和第三代慢病毒包装质粒系统，且具有慢病毒包装时间周期短（一周之内即可得到纯化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高的优势，可应用于针对不同基因和药物靶标的临床前细胞学实验和整体动物实验。非常适用于病毒包装初试者。

三、产品详情

1.产品组成

2.优势

1）可兼容第二代和第三代慢病毒包装质粒系统；

2）慢病毒包装时间周期短(最快4天即可得到纯化好的高滴度慢病毒)；

3）病毒滴度高，上清最高滴度可达10⁷ TU/mL，无须浓缩，可直接感染。浓缩后可达10⁹ TU/mL；

4）低成本，操作简单。

3.运输与保存方法

低温运输，-20℃保存，保质期1年。

四、慢病毒包装所需其他材料

1）慢病毒基因表达质粒（需无内毒素提取试剂盒制备）

2）DMEM（高糖）（Gibco货号：C11995500BT）

3）FBS （Gibco货号：10270106）

4）HEK-293T 低代次（推荐购买我司慢病毒包装专用293T）

5）细胞培养相关试剂耗材(如：培养皿，50 mL离心管、移液管等）

五、慢病毒包装流程（以10 cm培养皿为例）

1）293T细胞铺皿

培养中的293T细胞，汇合度约80%左右时，用0.25%的胰酶消化后，用DMEM+10%FBS的培养基终止，吹打成单个细胞，制备成细胞悬液并计数，调整细胞密度为3.0-5.0E+06 cells/mL，每个10 cm的培养皿添加1 mL细胞悬液，补充9 mL DMEM+10%FBS的培养基，按照“十字运动”方式混合均匀，37℃，5%CO₂培养18-24 h。

2）转染

细胞铺皿后的18-24 h内，细胞汇合度达到80-90%时，可以开始转染，配置转染复合物，取无菌的1.5 mL EP管，按照下表组分顺序添加，配置反应体系（10 cm培养皿为例）：

混合均匀后，室温静置10 min，然后均匀添加到293T细胞培养皿中，轻轻摇晃，混匀，37℃，5%CO₂继续培养。

3）换液

转染完12-16 h内，更换为DMEM+2%FBS+10 μL Titer Enhancer Reagent，10 mL/皿，37℃，5%CO₂培养48 h。

4）病毒收集

换液后48 h，即可收集细胞培养基上清，该上清可以直接用于感染靶细胞，或者进行后续的病毒浓缩纯化。

5）病毒分装与保存

将病毒上清液按照5-10 mL/管分装，保存于-80℃。

六、注意事项

1.慢病毒包装用的基因表达质粒，建议使用无内毒素试剂盒提取，质粒浓度控制在0.5-1.5 μg/μL之间，纯度A260/280=1.8-1.9；A260/230＞2.0。

2.不同培养环境下培养的293T细胞粒径可能略有差异，铺板时根据实际情况接种合适的细胞量，以确保铺板后18-24 h细胞汇合度达到80-90%左右。

3.293T细胞建议购买我司进行慢病毒包装筛选过的293T细胞系，以提高病毒包装率。

4.慢病毒包装上清滴度，对照病毒和干扰病毒一般在10⁶-10⁷ TU/mL，其它过表达病毒（插入总基因片段＜3kb）滴度一般在10⁵-10⁶ TU/mL。

5.为了您的健康，请在生物安全柜内操作相关实验，并做好相关防护措施，相应的实验废弃物高压灭菌后，交由专业处理机构处理。

6.本产品仅用于科研。

七、测试效果

1.包装载体信息

2.包装载体效果图

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