HBV是一种小型包膜DNA病毒，含有部分双链环状DNA（rcDNA），通过与钠离子牛磺胆酸共转运蛋白（NTCP，一种肝脏特异性胆汁酸和胆汁盐转运体）结合进入肝细胞。病毒进入肝细胞后，核衣壳释放至细胞质，运至核孔，rcDNA随即进入细胞核，在宿主机制催化下转化为共价闭合环状DNA（cccDNA）。cccDNA转录生成四种不同长度的mRNA：3.5kb的前基因组RNA（pgRNA）、编码聚合酶蛋白、HBV核心蛋白（HBc）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）的前核心RNA；编码HBsAg的2.4 kb和2.1 kb mRNA；第四种编码HBx蛋白的0.7 kb mRNA。其中HBc在病毒生命周期中至关重要，主要促进核衣壳形成，该过程由聚合酶与pgRNA的ε茎环结构结合触发，HBV衣壳组装成为新型CHB治疗的一个有希望的靶点。衣壳组装调节剂（CAMs）通过与HBc结合并加速衣壳组装来干扰pgRNA包装，阻止聚合酶-pgRNA复合物的衣壳化，从而阻断逆转录和HBV复制。CAMs作为一类新型     的治疗性小分子，有望应对全球持续面临的CHB挑战，A类衣壳组装调节剂（CAM-As）尤其具有吸引力，因为它们可在动物模型中诱导HBV感染的肝细胞丧失。CAM-As的第一个已知化学类型是杂芳基二氢嘧啶（HAPs），包括处于临床阶段的分子RG7907和GLS4。RG7907能显著降低CHB患者HBV的DNA，但未观察到 HBsAg的明显降低。因此开发新型非HAP CAM-As的HBV抑制剂迫在眉睫。

来自Aligos Belgium BV的Yannick Debing团队在Journal of Virology发表题为“Novel non-HAP class A HBV capsid assembly modulators have distinct in vitro and in vivo profiles”的研究论文，本文首次报道了非HAP类CAM-As ALG-005398和ALG-005863，在非HAP类CAM-As中CAM-At类的ALG-005398和ALG-006162在体外和体内均显示出色的抗病毒活性。

为了研究非HAP CAM-As，研究人员利用诱导型HBV细胞系HepG2.117，以HAP表型（CAM-Ah）的RG7907为参照，以非HAP CAM-As表型的ALG-005398（CAM-At）和ALG-005863（CAM-Ai）为研究对象，发现与CAM-Ah RG7907相比，ALG-005398和ALG-005863均以更小剂量依赖性方式抑制HBV DNA复制。随后研究人员在人源性的原代肝癌细胞（PHH）中评估了ALG-005398和ALG-005863的抗病毒活性，发现在病毒感染后5天加入ALG-005398或ALG-005863能显著抑制HBV DNA的生成；在感染时加入两种化合物可强烈抑制cccDNA的形成，减少细胞外HBsAg和细胞内HBV RNA。但是ALG-005863抑制效果略低于ALG-005398。

为进一步证实ALG-005398和ALG-005863是CAMs，将其与荧光染料结合的重组HBc一起孵育，以评估其对HBc结合和衣壳组装的影响，当衣壳组装时，荧光信号被淬灭。发现RG7907、ALG-005398和ALG-005863都表现出明显的剂量依赖性淬灭，与CAMs的预期一致。通过电子显微镜检测的技术，可以观察到异常衣壳的形成，这是CAM-As的标志。电子显微镜检测发现，与典型的CAM-Ah RG7907诱导的异常衣壳相比，CAM-At ALG-005398诱导产生的颗粒更小、更致密。相反，CAM-Ai ALG-005863诱导形成更大且不规则的颗粒。这些生化体系中观察到的差异表明，不同CAM-A在HBc结合模式和随后的HBc蛋白结构改变方面存在细微差异。

接下来研究人员通过免疫荧光染色观察HepG2.117细胞中不同类别的CAMs处理导致不同表型的HBc免疫染色模式。CAM-As治疗显示细胞质HBc减少，细胞核内出现大小和丰度不同的点状结构（斑点），随着这些斑点的形成，所有游离或未聚集的HBc从细胞核中消失。有趣的是，核斑点的大小和形状在CAM-Ah、CAM-At和CAM-Ai之间是不同的。ALG-005398处理后在细胞核中形成许多小斑点；ALG-005863处理后形成大的不规则斑点；RG7907处理后形成中等大小，大部分为圆形的聚集体。通过蛋白质免疫印迹法检测，发现使用RG7907、ALG-005398和ALG-005863处理后，HBc蛋白含量明显减少。CAM-At、CAM-Ai和CAM-Ah在生化和细胞实验中的所有的这些差异强调了它们与HBc的结合如何不同地影响最终的HBc构象和随后的聚集体形态，这些差异对由HBc聚集体诱导的下游效应具有重要意义。

之前研究发现使用RG7907等HAP CAM-As治疗后，AAV-HBV小鼠体内的HBsAg水平持续降低。为了研究非HAP CAM-As是否也能降低体内HBsAg水平，研究人员在AAV-HBV小鼠模型中评估了整体特性更优越的ALG-005398。CAM-Ah RG7907处理立即降低血清HBV DNA，血清HBsAg和HBeAg水平的下降在第14天开始出现延缓，伴随着短暂的ALT(丙氨酸氨基转移酶，ALT水平的升高被用作肝脏损伤的一个指标)升高（第14天增加8倍），到第35天恢复到基线。有趣的是，ALG-005398直到第35天才出现HBsAg和HBeAg下降，ALG-005398+RTV（利托那韦，用来增强药效）在第95天的HBsAg和第77天的HBeAg达到与RG7907相同的水平，而单药治疗仅HBsAg达到相同的水平。另外ALG-005398的稳定抑制动力学伴随着非常有限的ALT升高（在第35天最大两倍），而非增强的ALG-005398几乎没有。肝内HBV pgRNA的定量分析发现，增强型ALG-005398和RG7907的降幅非常相似，未增强的ALG-005398的降低幅度略小。肝脏免疫组化染色显示，在两种化合物的HBc和HBsAg阳性细胞数量都出现了大幅减少，并且均显著减少肝脏AAV-HBV外显子的数量，这表明在治疗停止后可持续产生应答。

为验证CAM-At降低HBsAg的效果，研究人员引入CAM-At ALG-006162 进行研究。ALG-006162是ALG-005398的类似物，具有更好的ADME（吸收、分布、代谢和排泄）特性。在治疗过程中，ALG-006162可立即降低HBV DNA，观察到HBsAg和HBeAg延迟且逐步减少，并伴有轻度且短暂的ALT升高。并且治疗结束的第189天HBsAg和HBeAg滴度未出现任何反弹。IHC染色结果发现，在第189天AAV-HBV小鼠模型肝脏中HBc和HBsAg显示出明显的阳性细胞减少。