2026-01-12 阅读量:104
简介
突触囊泡膜蛋白Synaptophysin(突触素,缩写SYP)是神经元突触前囊泡的标志性整合膜蛋白,其表达水平可反映突触的数量和密度,是神经生物学领域标记突触前结构、研究突触可塑性、解析神经环路连接的核心工具分子。其分布具有严格的突触前特异性:高度富集于神经元轴突末端的突触囊泡膜,尤其集中在突触前致密区;在神经元胞体、树突及非神经元细胞中几乎不表达,这是它作为突触前标记物的核心基础。
图1. 接受初级感觉运动皮层(SM1)投射的导水管周围灰质(PAG)神经元突触前末梢的标记,及其与蓝斑(LC)去甲肾上.腺素能(TH⁺)神经元、延髓头端腹内侧区(RVM)5-羟色胺能(TPH⁺)神经元的共定位(IF=15.7,客户文章:Wang GH et al., Nat Commun, 2025.)
病毒工具介绍
基于SYP的重组腺相关病毒(rAAV)载体,是实现突触前结构精准可视化的核心工具,以常用病毒rAAV-hSyn-mGFP-T2A-Synaptophysin-mRuby-WPRE-hGH polyA为例:
•hSyn为神经元特异性启动子,确保仅在神经元内驱动基因表达,避免非特异性干扰;
•通过T2A自剪切肽实现双蛋白独立表达——膜定位绿色荧光蛋白mGFP标记神经元整体形态(胞体膜、轴突膜、树突膜),Synaptophysin-mRuby融合蛋白则借助SYP的突触前靶向特性,精准锚定到突触前囊泡膜,实现红色荧光特异性标记;
•WPRE与hGH polyA元件可显著提升基因表达效率与稳定性,保证转录精确终止。
应用
在实验中,通常通过脑立体定位注射将上述病毒递送到目标脑区。感染数周后,通过多通道荧光显微镜或共聚焦显微镜观察,实现其核心功能:
•通过绿色荧光(mGFP)标记神经元整体形态;
•通过红色荧光(mRuby)实现突触前定位,展示突触前末梢的精确分布,进而反映突触的分布、密度或形态等,为探究突触可塑性提供直观依据;
•结合红绿色荧光的空间对应关系,解析神经环路连接。
客户案例分享
rAAV2/9-hSyn-DIO-mGFP-T2A-Synaptophysin-mRuby-WPRE-hGH pA
rAAV2/9-CaMKIIa-Cre-WPRE-hGH pA
为明确内侧前额叶皮层(mPFC)向丘脑室旁核(PVT)的谷氨酸能投射连接,研究采用双病毒联用策略:将CaMKIIa启动子(靶向谷氨酸能神经元)驱动的Cre顺行病毒,与Cre依赖的突触前定位病毒(rAAV2/9-hSyn-DIO-mGFP-T2A-Synaptophysin-mRuby)单侧注射至mPFC。后者借助Synaptophysin的突触前靶向特性,通过Synaptophysin-mRuby融合蛋白的红色荧光精准锚定突触前末梢;同时,独立表达的mGFP标记谷氨酸能投射神经元整体形态。实验结果显示,PVT神经元周围出现高强度红色与绿色荧光信号,直接证明mPFC谷氨酸能神经元通过突触前末梢对PVT形成神经支配,为该通路的解剖学连接提供了直观的可视化证据。
图2. mPFC和PVT之间存在结构连接(IF=12.4,客户文章:Li X et al., Theranostics, 2025.)
在甲基.苯丙丶胺(METH)条件位置偏爱(CPP)形成机制研究中,研究人员同样采用上述双病毒联用策略标记mPFC投射到PVT的谷氨酸能突触前末梢(mRuby⁺),并结合谷氨酸能突触前囊泡标志物——囊泡谷氨酸转运体2(vGluT2)进行共定位分析。结果显示,与生理盐水组相比,METH处理组小鼠PVT区域内,Synaptophysin(红色)和vGluT2(紫色)共标(Syn⁺vGluT2⁺)末梢数量显著增多,提示在METH CPP形成过程中,mPFC-PVT通路突触前结构发生显著重塑与强化。
图3. METH CPP形成过程中,PVT内mPFC谷氨酸能末梢数量增多(IF=12.4,客户文章:Li X et al., Theranostics, 2025.)
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