钙成像产品说明书
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rAAV:Recombinant adeno-associated virus,重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少引起免疫应答),表达时间长,且能感染多种细胞和组织。
病毒用途:利用基因编码钙指示剂(genetically encoded calcium indicators,GECIs)测量神经元活动已成为神经科学中广泛使用的方法,GECIs进行钙成像通常用于测量完整神经系统的神经活动,如检测大量神经元胞体的活动,或追踪神经元亚细胞(如轴突、树突和单个突触)的动态。钙离子成像技术(Calcium imaging system)属于光遗传学技术中的一类,是利用可以感应Ca2+浓度的钙离子指示剂,检测细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号,从而使细胞电活动转化为可记录的光信号。
启动子:hSyn,人突触蛋白启动子,成熟神经元特异性启动子,448bp。
功能基因:CaMPARI2.0:EricR Schreiter团队首先对纯化的CaMPARI2.0蛋白进行测试,发现其绿色和红色的荧光强度分别比第一代CaMPARI蛋白高60%和130%,且钙解离速率也提高了数倍,具有更强的敏感性。更激动人心的是在无钙条件下CaMPARI2.0光转化率(PC)比前身大大降低,这意味着在钙离子浓度不同时,CaMPARI2.0将表现出更高的对比度。利用“超级变色龙”CaMPARI2.0蛋白,可研究大范围的脑区神经在复杂的行为中的活动。CaMPARI2可能在脑功能图谱和连接组学的研究方面有着重要且广泛的应用价值。
CaMPARI2
CaMPARI2-F391W
CaMPARI2-L398T(第398位亮氨酸突变成苏氨酸)
NES:nuclear export signals,核输出信号序列,只在核外分布。
标签:Flag:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK),同时载体中构建的Kozak 序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。融合FLAG的目的蛋白,可直接通过FLAG进行非变性纯化亲和层析,纯化有活性的融合蛋白,并且纯化效率高。也可通过Westem Blot、ELSA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。融合在N端的FLAG,其可被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白。
HA:HA标签蛋白序列为YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。
His:6个组氨酸残基构成的标签蛋白,连接在目的蛋白的C端或N端,相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性,因此在天然和变性的条件下,多组氨酸标签是被公认为最广泛使用的亲和标签用于一系列的蛋白纯化目的。可以检测和纯化重组蛋白而无需使用蛋白特异性的抗体或探针,同时抗His标签抗体的存在用于His标签蛋白的检测中使6xHis标签更加的普遍和受欢迎。主要用途包括:亲和纯化蛋白、检测目的蛋白、蛋白相互作用。
Myc:由N-EQKLISEEDL-C10个氨基酸残基构成的标签蛋白,可放在目的蛋白的C端或N端,但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力,因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。
注意:
1.4℃短期保存;-80℃长期保存;
2.-80℃可保存6个月以上,每冻融一次,滴度降低10%,应避免反复冻融;如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前重新测定病毒滴度;
3.根据实验需要,病毒可适当稀释且分装成每次实验所需体积。