钙成像产品说明书
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rAAV:Recombinant adeno-associated virus,重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少引起免疫应答),表达时间长,且能感染多种细胞和组织。
病毒用途:利用基因编码钙指示剂(genetically encoded calcium indicators,GECIs)测量神经元活动已成为神经科学中广泛使用的方法,GECIs进行钙成像通常用于测量完整神经系统的神经活动,如检测大量神经元胞体的活动,或追踪神经元亚细胞(如轴突、树突和单个突触)的动态。钙离子成像技术(Calcium imaging system)属于光遗传学技术中的一类,是利用可以感应Ca2+浓度的钙离子指示剂,检测细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号,从而使细胞电活动转化为可记录的光信号。
启动子:CAG,强启动子,人工构建的组合启动子,由巨细胞病毒早期增强子和鸡β-肌动蛋白启动子组成,1731bp。
功能基因:jGCaMP7:通过优化钙离子探针的Ca2+亲和力同时进一步提高探针的灵敏度、信噪比、半衰期和动态范围,来自霍华德·休斯医学研究所的Karel Svoboda、Loren Looger和Vivek Jayaraman等课题组合作研发出了jGCaMP7系列,包括:jGCaMP7s(灵敏)、jGCaMP7f(快速动力学)、jGCaMP7b(较亮的基线荧光)和jGCaMP7c(高对比度),专门用于检测特定环境下的神经元活动。追踪神经元亚细胞的动态对神经环路研究具有重要意义,但树突、轴突等亚细胞结构小,jGCaMP6灵敏度低,成像保真度不高,而jGCaMP7s,jGCaMP7f,jGCaMP7b很大程度上提高了在不同钙离子浓度下的灵敏度,jGCaMP7f同时具有较快的反应速率,这对于神经元亚细胞的动态检测非常重要。jGCaMP7在体内和体外都进行了测试,其性能明显优于GCaMP6。jGCaMP7s灵敏性可达GCaMP6s的5倍以上,且速率也快于GCaMP6s;jGCaMP7b灵敏度达到GCaMP6s3倍,荧光亮度增强50%;jGCaMP7c灵敏度是GCaMP6s的2.7倍,且对比度增强;jGCaMP7f反应速率是GCaMP6f的5倍及GCaMP6s的3倍。
jGCaMP7s 更灵敏
jGCaMP7f 快速动力学
jGCaMP7b 高背景
jGCaMP7c 高对比度、低背景
调控元件:FLEX:DIO和FLEX是非常接近的,除了所用的间隔1和间隔2序列有所不同。DIO相反向里,Flex相反向外。
注意:
1.4℃短期保存;-80℃长期保存;
2.-80℃可保存6个月以上,每冻融一次,滴度降低10%,应避免反复冻融;如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前重新测定病毒滴度;
3.根据实验需要,病毒可适当稀释且分装成每次实验所需体积。