钙成像产品说明书
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rAAV:Recombinant adeno-associated virus,重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少引起免疫应答),表达时间长,且能感染多种细胞和组织。
病毒用途:利用基因编码钙指示剂(genetically encoded calcium indicators,GECIs)测量神经元活动已成为神经科学中广泛使用的方法,GECIs进行钙成像通常用于测量完整神经系统的神经活动,如检测大量神经元胞体的活动,或追踪神经元亚细胞(如轴突、树突和单个突触)的动态。钙离子成像技术(Calcium imaging system)属于光遗传学技术中的一类,是利用可以感应Ca2+浓度的钙离子指示剂,检测细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号,从而使细胞电活动转化为可记录的光信号。
启动子:GfaABC1D,人小版星形胶质细胞特异性启动子,992bp。
功能基因:GCaMP:GCaMP由绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、钙调蛋白(calmodulin,CaM)和肌球蛋白轻链激酶的一段肽段序列M13构成。当有Ca2+结合CaM时,CaM发生构象变化,其轻链区可以结合M13,致使GFP在特定波长的光照下其发色团的质子化作用增强,吸光度增加从而使GFP发出强烈的荧光。GCaMP6是目前常规的GECI,它的钙指示功能达到甚至超过了常用的化学钙指示剂。它有三种常用的亚型,6s,6f和6m,其中对于钙离子的结合力,6s>6m>6f,所以6s最敏感,适合低频信号的指示,6f解离最快,适合高频信号的指示,6m结合活性适中,适用的范围最广。GCaMP6是一种超灵敏的荧光蛋白,可以特异高效地反映细胞内游离Ca2+浓度的变化,在活体下,对单个动作电位诱发的钙信号,GCaMP6比GCaMP3强10倍,动力学快2倍。因此GCaMP6荧光蛋白可以作为一种超敏Ca2+探针,用于研究生理和病理情况下外界因素对活细胞内Ca2+的影响。激发波长为495nm。
GCaMP6s slow(100-150 ms)光强最强,更晚淬灭(低频最敏感)
GCaMP6m medium(75-100 ms)光强和淬灭中等(中等)
GCaMP6f fast(50-75 ms)光强较弱,更快淬灭(高频)
定位元件:lck:膜定位。
注意:
1.4℃短期保存;-80℃长期保存;
2.-80℃可保存6个月以上,每冻融一次,滴度降低10%,应避免反复冻融;如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前重新测定病毒滴度;
3.根据实验需要,病毒可适当稀释且分装成每次实验所需体积。