Cn|En

技术与服务

病毒研究和疫苗开发

病毒研究和疫苗开发

一、病毒蚀斑(Plaques)和病毒灶(Foci)-明场计数

二、病毒灶斑(Foci)-荧光计数

——Dylight488荧光病毒灶(Foci)计数

     Vero宿主细胞铺入96孔板中,孵育过夜,加入5倍梯度稀释的流感病毒颗粒。再培养24hrs后,用偶联Dylight488的病毒蛋白一抗标记感染病毒灶,计算感染细胞数。

图1.Dylight488标记的被流感病毒感染的阳性细胞计数


——GFP表达荧光病毒灶Foci计数

     Vero宿主细胞接种在96孔板中孵育过夜,加入2倍梯度稀释的表达GFP的流感病毒颗粒,孵育24h后计数感染细胞数。

图2.荧光成像。上图为每孔荧光病毒蚀斑情况,不同病毒梯度组之间病毒感染差异一目了然。


三、病毒滴度检测

     通过荧光标记被感染细胞的方法,直接细胞计数测量病毒的滴度。

——用mKate2荧光蛋白指标在96孔板中检测流感病毒滴度

图3.表达mKate2的感染细胞明场和荧光图像。96孔板中铺入MDCK宿主细胞,贴壁过夜。mKate2标记的流感病毒进行5倍梯度稀释,并加入到宿主细胞里。孵育24hrs后计数分析。


——在96孔板中利用GFP荧光蛋白标签检测Zika病毒滴度

     通过白光通道识别Raji细胞,在此基础上利用绿色通道对GFP荧光标记细胞直接检测。Vero细胞既可以用白光通道,也可以用Hoechst荧光通道为依据,进行GFP荧光的判定。

图4.细胞成像。在96孔板中铺入Vero和Raji宿主细胞,贴壁生长过夜,以2倍梯度稀释加入病毒颗粒(RVP-GFP),孵育24hrs,对感染细胞成像。


四、抗体中和试验

     中和试验是用来检测和定量抗体中和能力的实验。中和试验还可以用来测定化合物药物的抗病毒效果。可分为3种,蚀斑减少中和试验(Plaque reduction neutralization test,PRNT)、灶斑减少中和实验(Focus reduction neutralization test,FRNT),以及微量中和试验(Microneutralization)。微量中和试验(Microneutralization)属于小体积,微孔板(96-384)中进行的中和试验,适合筛选。


图5.不同疫苗的中和试验结果


优势

1)直接在96孔板中进行高通量自动成像和分析;

2)无需胰酶消化,直接对受感染细胞进行计数,8min内完成抗体中和测定;

3)结合自动化叠扳机,可一次性批量分析50块板子。

4)多通道扫描分析一块96孔板不超过15分钟;


五、病毒感染及监测

1. 监测病毒感染的过程。

2. 检测细胞固定及抗病毒蛋白免疫染色后的病毒感染性。


六、病毒转导效率检测

1.直接检测病毒转导效率;

2.可计算瞬时和稳定转导效率;

3.可用于AVV病毒载体的病毒滴度优化。

4.轻松快速检测慢病毒转导效率;

图6.慢病毒梯度转导HEK293T细胞(明场+GFP荧光)。第一排:明场视野下的细胞图像;第二排:不同病毒梯度下GFP阳性的细胞图像;第三排:红色轮廓圈定的GFP阳性细胞。接种并培养HEK293T细胞至细胞覆盖率80%。加入10倍梯度稀释的慢病毒孵育后,进行每孔明场视野和GFP通道图像扫描,并分析转导效率。


七、细胞病变效应(CPE)

     快速评估病毒感染。提供高质量的明场全孔图片,对基于宿主细胞层特征性改变进行CPE效应的量化。支持感染相关的,基于荧光检测的功能性实验。

图7.病毒感染评估。针对牛病毒性腹泻病(BVD)和牛鼻甲状腺细胞感染(BT2),将病毒梯度稀释接种于孔板中,设置阈值功能可以直观显示出红色孔(受感染)和绿色孔(不受感染)。



信息订阅

我们将及时向您推送最新产品资讯

免责声明| 法律支持| 联系方式

地址:中国武汉东湖高新区光谷七路128号中科开物产业园1号楼
市场:027-65023363
行政/人事:027-62439686
邮箱:marketing@brainvta.com

Copyright ©2021 武汉枢密脑科学技术有限公司. All RIGHTS RESERVED.
鄂ICP备2021009124号 DIGITAL BY VTHINK